Highlight

งานวิจัยได้พัฒนาแอนติบอดีชนิด scFv ใหม่เพื่อมุ่งเป้า EGFR ในมะเร็งท่อน้ำดี (CCA) โดยคัดเลือกจากคลัง phage display ได้ 3 ตัว (E1, G8, H2) ที่จับ CCA จำเพาะและเข้าสู่เซลล์ได้ดี โดย G8/H2 จับโดเมน EGFR-TK ระดับนาโนโมลาร์ ยับยั้งไคเนส ลด EGFR phosphorylation ลดความมีชีวิตและกระตุ้น apoptosis ขณะที่ E1 ยับยั้งการเพิ่มจำนวนผ่าน G1 arrest

ที่มาและความสำคัญ

มะเร็งท่อน้ำดี (cholangiocarcinoma; CCA) เป็นมะเร็งที่มีความรุนแรงสูง ตรวจพบมักอยู่ในระยะลุกลาม และมีทางเลือกการรักษาจำกัด ทำให้ผลการรักษาและอัตราการรอดชีวิตยังไม่ดี แม้จะมีการพัฒนายามุ่งเป้า แต่ผู้ป่วยจำนวนมากยังดื้อยาและเกิดการกลับเป็นซ้ำได้บ่อย ผู้ป่วย CCA แสดงออก epidermal growth factor receptor (EGFR) มากเกินสัมพันธ์กับการกลับเป็นซ้ำและพยากรณ์โรคที่แย่ อย่างไรก็ตามการรักษาที่มุ่งเป้า EGFR ที่ใช้ในปัจจุบันให้ประสิทธิผลจำกัดใน CCA อาจเนื่องมาจากความหลากหลายของก้อนมะเร็ง การส่งสัญญาณชดเชยของเส้นทางอื่น และความสามารถของเซลล์มะเร็งในการหลบเลี่ยงการยับยั้ง ดังนั้นงานวิจัยนี้จึงมีเป้าหมายเพื่อค้นหา “ตัวเลือกใหม่” ในการยับยั้ง EGFR ที่อาจมีศักยภาพมากกว่าเดิม โดยใช้เทคโนโลยี phage display คัดเลือกแอนติบอดีจากคลัง naïve single-chain variable fragment (scFv) มนุษย์ผ่านกระบวนการ subtractive bio-panning เพื่อให้ได้ scFv ที่จับกับเซลล์ CCA อย่างจำเพาะและลดการจับข้ามกับเซลล์ปกติ/มะเร็งชนิดอื่น แนวทางนี้คาดว่าจะได้แอนติบอดีที่สามารถเข้าสู่เซลล์และยับยั้งโดเมนไทโรซีนไคเนสของ EGFR (EGFR-TK) ได้โดยตรง ซึ่งอาจนำไปสู่การพัฒนาเครื่องมือรักษาแบบแอนติบอดีสำหรับ CCA ที่เป้าหมายคือ EGFR

Abstract

Cholangiocarcinoma (CCA) is an aggressive malignancy with limited treatment options. EGFR overexpression is associated with tumor recurrence and poor prognosis, yet current EGFR-targeted therapies show limited efficacy. To identify alternative therapeutic candidates, we performed subtractive bio-panning of a naïve human single-chain variable fragment (scFv) phage display library against CCA cell lysates. Three novel scFv antibodies-E1, G8, and H2-were selected based on preferential binding to CCA cells with minimal cross-reactivity to unrelated cancers and normal fibroblasts. Surface plasmon resonance and kinase inhibition assays demonstrated that G8 and H2 bound the EGFR tyrosine kinase (EGFR-TK) domain with nanomolar affinities and suppressed kinase activity, whereas E1 showed weak binding and no kinase inhibition. All three scFvs exhibited efficient internalization into EGFR-overexpressing HuCCA-1 cells. Functional analyses revealed distinct effects on cell growth: G8 and H2 reduced EGFR phosphorylation, decreased cell viability, and induced apoptosis accompanied by S/G₂-M phase accumulation, whereas E1 primarily inhibited proliferation through G₁-phase arrest without significantly affecting EGFR phosphorylation. Molecular docking predicted that G8 interacts near the ATP-binding pocket and H2 at the dimerization interface of EGFR-TK. These interactions may contribute to EGFR inhibition in HuCCA-1 cells. These findings suggest that G8 and H2 function as intracellular inhibitors of EGFR-TK activity and are promising candidates for antibody-based therapy in EGFR-driven CCA.

KEYWORDS: Antibodies internalization, Apoptosis, Cholangiocarcinoma, EGFR tyrosine kinase, Single-chain variable fragment (scFv)

Citation: Sayinta, A., Duangdara, J., Sumphanapai, T., Rangnoi, K., Boonsri, B., Supradit, K., Jongkamonwiwat, N., Choowongkomon, K., Thitapakorn, V., Yamabhai, M., & Wongprasert, K. (2025). Identification of internalizing ScFvs for EGFR inhibition and apoptosis induction in cholangiocarcinoma cells. Scientific Reports, 15(1), 40648.
DOI: 10.1038/s41598-025-24324-w

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ รองศาสตราจารย์ ดร.นพพร จงกมลวิวัฒน์ อาจารย์ ดร.จินต์จุฑา ดวงดารา
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย: น.ส.อภิญญา สายอินต๊ะ
แหล่งทุนวิจัย: Mahidol University (Research Grant No. NDFR26/2564) and the National Research Council of Thailand (NRCT)
Credit ภาพ: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
Webmaster: ว่าที่ ร.อ. นเรศ จันทรังสิกุล

Highlight

งานวิจัยนี้ค้นพบ cir-miRNA สามชนิด ได้แก่ miR-423-5p, miR-93-5p และ miR-4532 ที่มีศักยภาพเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพในการวินิจฉัยมะเร็งท่อน้ำดี (CCA) โดยเฉพาะ miR-4532 ซึ่งแสดงความไวและความจำเพาะสูงในการแยกผู้ป่วย CCA จากกลุ่มสุขภาพดีและผู้ติดเชื้อ Opisthorchis viverrini ผลการวิจัยนี้มีความสำคัญในการพัฒนาวิธีวินิจฉัยที่แม่นยำในพื้นที่เสี่ยงต่อโรค CCA

ที่มาและความสำคัญ

มะเร็งท่อน้ำดี (Cholangiocarcinoma, CCA) เป็นโรคที่มีอัตราการเจ็บป่วยและเสียชีวิตสูง โดยส่วนหนึ่งเกิดจากการที่ผู้ป่วยมักไม่มีอาการในระยะแรก และขาดวิธีการวินิจฉัยที่มีประสิทธิภาพ ทำให้ผู้ป่วยมักได้รับการวินิจฉัยในระยะท้ายของโรค ซึ่งส่งผลต่อการรักษาและโอกาสรอดชีวิต

ปัจจุบันมีความสนใจในการใช้ miRNA หมุนเวียนในพลาสมา (Circulating miRNA, cir-miRNA) เป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพ (Biomarker) สำหรับวินิจฉัยโรค เนื่องจาก cir-miRNA มีความเฉพาะเจาะจงและตรวจวัดได้ง่าย งานวิจัยนี้จึงมุ่งศึกษาศักยภาพของ cir-miRNA ในการเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพสำหรับวินิจฉัยมะเร็งท่อน้ำดี โดยแบ่งการศึกษาเป็น 2 ระยะ คือระยะค้นหา (Discovery phase) และระยะยืนยันผล (Validation phase) ผลการวิจัยพบว่า cir-miRNA สามชนิด ได้แก่ miR-423-5p, miR-93-5p และ miR-4532 มีศักยภาพเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่ช่วยแยกผู้ป่วยมะเร็งท่อน้ำดีจากกลุ่มสุขภาพดีและผู้ติดเชื้อ Opisthorchis viverrini (OV) โดยเฉพาะ miR-4532 ที่แสดงความไวและความจำเพาะสูงที่สุด งานวิจัยนี้มีความสำคัญต่อการพัฒนาวิธีการวินิจฉัยที่แม่นยำและเหมาะสมสำหรับพื้นที่ที่มีการติดเชื้อ OV ซึ่งเป็นปัจจัยเสี่ยงสำคัญของโรค CCA

Abstract

Background

Cholangiocarcinoma (CCA) is high in morbidity and mortality rates which may be due to asymptomatic and effective diagnostic methods not available. Therefore, an effective diagnosis is urgently needed.

Methods

Investigation of plasma circulating miRNA (cir-miRNA) was divided into two phases, including the discovery phase (pooled 10 samples each from three pools in each group) and the validation phase (17, 16, and 35 subjects of healthy control (HC), O. viverrini (OV), and CCA groups, respectively). The plasma from healthy control subjects, O. viverrini infected subjects, and CCA subjects was used. In the discovery phase, plasma was pooled by adding an equal volume of plasma, and cir-miRNA was isolated and analyzed with the nCounter^® SPRINT Profiler. The significantly different cir-miRNAs were selected for the validation phase. In the validation phase, cir-miRNA was isolated and analyzed using real time-quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR). Subsequently, statistical analysis was conducted, and diagnostic parameters were calculated.

Results

Differential plasma cir-miRNA profile showed at least three candidates including miR-423-5p, miR-93-5p, and miR-4532 as potential biomarkers. From validation of these cir-miRNAs by RT-qPCR, the result showed that the satisfied sensitivity and specificity to differential CCA group from HC and OV group was obtained from miR-4532 (P < 0.05) while miR-423-5p and miR-93-5p can be used for differential CCA from OV and HC group (P < 0.05) with high specificity but limited the sensitivity. In conclusion, candidate cir-miRNAs have been identified as potential biomarkers including miR-423-5p, miR-93-5p and miR-4532. Screening by miR-4532 and confirmed with miR-423-5p, miR-93-5p were suggested for differential CCA patients in the endemic area of O. viverrini.

KEYWORDS: Biomarker, Cholangiocarcinoma, Circulating miRNA, Opisthorchis viverrini

Citation: Supradit, K., Prasopdee, S., Phanaksri, T., Tangphatsornruang, S., Pholhelm, M., Yusuk, S., Butthongkomvong, K., Wongprasert, K., Kulsantiwong, J., Chukan, A., Tesana, S., & Thitapakorn, V. (2024). Differential circulating miRNA profiles identified miR-423-5p, miR-93-5p, and miR-4532 as potential biomarkers for cholangiocarcinoma diagnosis. PeerJ, 12(12), Article e18367. https://doi.org/10.7717/peerj.18367

RELATED SDGs:

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
Credit ภาพ: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
เว็บมาสเตอร์: ว่าที่ ร.อ. นเรศ จันทรังสิกุล

Highlight

การวิเคราะห์โปรไฟล์ไมโครอาร์เอ็นเอ (miRNA) ในเลือดของผู้ป่วยมะเร็งท่อน้ำดี (CCA) ผู้ติดเชื้อพยาธิ Opisthorchis viverrini และคนสุขภาพดี โดยใช้เทคโนโลยี NGS พบว่า miR-194–5p และ miR-192–5p มีศักยภาพเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพในการตรวจหา CCA และการติดเชื้อ O. viverrini ในระยะแรก ซึ่งจะช่วยให้การรักษามีประสิทธิภาพยิ่งขึ้นและเพิ่มโอกาสในการรอดชีวิตของผู้ป่วย

ที่มาและความสำคัญ

มะเร็งท่อน้ำดี (Cholangiocarcinoma: CCA) เป็นโรคมะเร็งที่มีความรุนแรงสูงและพบได้บ่อยในภูมิภาคเอเชียตะวันออกเฉียงใต้ โดยเฉพาะจากการติดเชื้อพยาธิใบไม้ตับ Opisthorchis viverrini การติดเชื้อนี้มักไม่แสดงอาการ ทำให้ผู้ป่วยจำนวนมากได้รับการวินิจฉัยเมื่อโรคอยู่ในระยะลุกลาม ส่งผลให้มีทางเลือกในการรักษาน้อยลงและโอกาสรอดชีวิตน้อย ไมโครอาร์เอ็นเอ (miRNAs) ได้รับการยอมรับว่าเป็นตัวบ่งชี้ชีวภาพที่มีศักยภาพสำหรับการตรวจหามะเร็งในระยะแรก แต่การนำมาใช้สำหรับวินิจฉัย CCA ยังมีข้อจำกัดอยู่มาก การศึกษานี้มีเป้าหมายเพื่อวิเคราะห์โปรไฟล์ของ miRNAs ในเอ็กโซโซม ซึ่งเป็นถุงขนาดเล็กในเลือดใน ผู้ป่วย CCA ที่ติดเชื้อ O. viverrini และคนสุขภาพดี เพื่อพัฒนาเป็นตัวบ่งชี้ทางชีวภาพที่เชื่อถือได้สำหรับการตรวจวินิจฉัยในระยะเริ่มต้น ซึ่งจะเพิ่มโอกาสรอดชีวิตของผู้ป่วยได้มากขึ้น

Abstract

Cholangiocarcinoma (CCA) is a life-threatening disease that impacts patients worldwide. In Southeast Asian countries, the liver fluke Opisthorchis viverrini plays a major role in inducing carcinogenesis of the bile ducts. Due to its asymptomatic nature, O. viverrini infections are rarely treated, consequently leading to the development of advanced stages of CCA before diagnosis. Despite the current use of exosomal microRNAs (miRNA) as diagnostic biomarkers for the early detection of many types of cancer, the applications for miRNA remain limited with CCA. Circulating exosomes, membranous vesicles essential for intercellular communication, were found to contain unique miRNA. In this study, we conducted next-generation sequencing (Ion Torrent PGM) and bioinformatics to characterize and compare the contents of exosomal miRNA derived from the plasma of CCA patients, O. viverrini-infected patients, and healthy individuals, as well as to identify and validate key molecules as markers for screening the diagnosis of CCA and O. viverrini infection. The obtained results showed the success of using NGS technology in discovering exosomal miRNAs, specifically miR-194–5p and miR-192–5p, both of which were upregulated in the O. viverrini-infected group. Interestingly, miR-192–5p was upregulated while miR-194–5p was downregulated in CCA, suggesting their potential use as biomarkers for screening CCA and O. viverrini infection, especially in O. viverrini-endemic areas.

KEYWORDS: Opisthorchis viverrini, Cholangiocarcinoma, miRNA, Exosome, Biomarker

Citation: Supradit, K., Wongprasert, K., Tangphatsornruang, S., Yoocha, T., Sonthirod, C., Pootakham, W., Thitapakorn, V., Butthongkomvong, K., Phanaksri, T., Kunjantarachot, A., Klongprateeppon, H., Sattavacharavech, P., & Prasopdee, S. (2024). microRNA profiling of exosomes derived from plasma and their potential as biomarkers for Opisthorchis viverrini-associated cholangiocarcinoma. Acta tropica, 258, 107362.
https://doi.org/10.1016/j.actatropica.2024.107362

RELATED SDGs:

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
Credit ภาพ: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ

ชื่องานวิจัยภาษาไทย

CP-673451 ตัวยับยั้งไทโรซีนไคเนสของตัวรับเพลทเลทดีไลฟ์ โกรทแฟคเตอร์ ชักนำให้เกิดการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสในเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีที่สัมพันธ์กับพยาธิใบไม้ตับโดยยับยั้ง Nrf2 และเพิ่ม ROS

Highlight

ยีน PDGF และ PDGFR มีการแสดงออกในเนื้อเยื่อ CCA มากกว่าเนื้อเยื่อปกติโดยรอบ PDGFR-α มีการแสดงออกในระดับสูงในเซลล์มะเร็งท่อน้ำดี (CCA) ในขณะที่ PDGFR-β ส่วนใหญ่พบใน CAF สารยับยั้งที่จำเพาะต่อ PDGFR คือ CP-673451 ยับยั้งเส้นทาง PI3K/Akt/Nrf2 ในเซลล์ CCA ที่เกี่ยวข้องกับพยาธิใบไม้ตับ ส่งผลให้การแสดงออกของยีนต้านอนุมูลอิสระลดลง จากการควบคุมโดย Nrf2 ที่ลดลง นำไปสู่การเพิ่มขึ้นของระดับอนุมูลอิสะในเซลล์ (ROS) ทำให้เซลล์ CCA ตายแบบอะพอพโทซิส งานวิจัยนี้บ่งชี้ว่า CP-673451 มีแนวโน้มเป็นยามุ่งเป้าสำหรับการรักษา CCA

ที่มาและความสำคัญ

งานวิจัยนี้มุ่งเน้นศึกษาบทบาทของ platelet-derived growth factors (PDGFs (PDGFs) และตัวรับ (PDGFRs) ในมะเร็งท่อน้ำดี (CCA) ซึ่งมีบทบาทสำคัญในการอยู่รอดของเซลล์ CCA โดยส่งเสริมการสื่อสารระหว่างเซลล์มะเร็งและไฟโบรบลาสต์ที่เกี่ยวข้องกับมะเร็ง (CAF) ดังนั้น PDGFR จึงมีศักยภาพเป็นเป้าหมายในการรักษา CCA การทดลองทางคลินิกก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นประสิทธิภาพที่จำกัด ในการใช้สารยับยั้ง PDGFR สำหรับการรักษา CCA การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทำความเข้าใจการแสดงออกของ PDGF/PDGFR และกลไกของสารยับยั้ง PDGFR ใน CCA ที่เกี่ยวข้องกับพยาธิใบไม้ตับ เราค้นพบว่ายีน PDGF และ PDGFR มีการแสดงออกในเนื้อเยื่อ CCA มากกว่าเนื้อเยื่อปกติโดยรอบ PDGFR-α มีการแสดงออกอย่างสูงในเซลล์ CCA ในขณะที่ PDGFR-β ส่วนใหญ่พบใน CAF เราทดสอบสารยับยั้งที่จำเพาะต่อ PDGFR คือ CP-673451 กับเซลล์ CCA ที่เกี่ยวข้องกับพยาธิใบไม้ตับ พบว่า CP-673451 ยับยั้งเส้นทาง PI3K/Akt/Nrf2 ส่งผลให้การแสดงออกของยีนต้านอนุมูลอิสระลดลง จากการควบคุมโดย Nrf2 ที่ลดลง นำไปสู่การเพิ่มขึ้นของระดับอนุมูลอิสระในเซลล์ (ROS) ทำให้เซลล์ CCA ตายแบบอะพอพโทซิส งานวิจัยนี้บ่งชี้ว่า CP-673451 มีแนวโน้มเป็นยามุ่งเป้าสำหรับการรักษา CCA การค้นพบนี้สนับสนุนการตรวจสอบทางคลินิกของ CP-673451 โดยเฉพาะอย่างยิ่งในผู้ป่วย CCA ที่เกี่ยวข้องกับพยาธิใบไม้ตับ

Abstract

Platelet-derived growth factors (PDGFs) and PDGF receptors (PDGFRs) play essential roles in promoting cholangiocarcinoma (CCA) cell survival by mediating paracrine crosstalk between tumor and cancer-associated fibroblasts (CAFs), indicating the potential of PDGFR as a target for CCA treatment. Clinical trials evaluating PDGFR inhibitors for CCA treatment have shown limited efficacy. Furthermore, little is known about the role of PDGF/PDGFR expression and the mechanism underlying PDGFR inhibitors in CCA related to Opisthorchis viverrini (OV). Therefore, we examined the effect of PDGFR inhibitors in OV-related CCA cells and investigated the molecular mechanism involved. We found that the PDGF and PDGFR mRNAs were overexpressed in CCA tissues compared to resection margins. Notably, PDGFR-α showed high expression in CCA cells, while PDGFR-β was predominantly expressed in CAFs. The selective inhibitor CP-673451 induced CCA cell death by suppressing the PI3K/Akt/Nrf2 pathway, leading to a decreased expression of Nrf2-targeted antioxidant genes. Consequently, this led to an increase in ROS levels and the promotion of CCA apoptosis. CP-673451 is a promising PDGFR-targeted drug for CCA and supports the further clinical investigation of CP-673451 for CCA treatment, particularly in the context of OV-related cases.

KEYWORDS: cholangiocarcinoma, Opisthorchis viverrini, CP-673451, PDGFR inhibitor, Nrf2

Citation: Duangdara J, Boonsri B, Sayinta A, Supradit K, Thintharua P, Kumkate S, Suriyonplengsaeng C, Larbcharoensub N, Mingphruedhi S, Rungsakulkij N, et al. CP-673451, a Selective Platelet-Derived Growth Factor Receptor Tyrosine Kinase Inhibitor, Induces Apoptosis in Opisthorchis viverrini-Associated Cholangiocarcinoma via Nrf2 Suppression and Enhanced ROS. Pharmaceuticals. 2024; 17(1):9. https://doi.org/10.3390/ph17010009

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย: Jinchutha Duangdara
แหล่งทุนวิจัย: สำนักงานคณะกรรมการส่งเสริมวิทยาศาสตร์ วิจัยและนวัตกรรม (สกสว.)
ภาพถ่าย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ

Highlight:

สารยับยั้ง SRPK1 ลดกระบวนการฟอสโฟรีเลชั่นของ SRSF1 ในเซลล์มะเร็งท่อน้ำดี ลดการเคลื่อนย้าย SRSF1 ไปยังนิวเคลียส เซลล์ที่ได้รับสารยับยั้ง SRPK1 มีระดับโปรตีน VEGFA-165b เพิ่มขึ้น เซลล์เยื่อบุผนังหลอดเลือด (HUVEC) ที่เพาะเลี้ยงด้วยอาหารเลี้ยงเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีที่ได้รับสารยับยั้ง SRPK1 ที่มีปริมาณ VEGF-A165b สูง เกิดการสร้างหลอดเลือดใหม่น้อยลง

ที่มาและความสำคัญ

มะเร็งหลายชนิดมีการแสดงออกของโปรตีน SRPK1 ซึ่งเป็นโปรตีนควบคุมการ splicing ของ mRNA มากผิดปกติ บ่งชี้ว่ามีศักยภาพเป็นเป้าหมายการรักษามะเร็ง และมะเร็งระยะแพร่กระจายมีการแสดงออกของ angiogenic isoform ของ vascular endothelial growth factor (VEGF) มาก การศึกษานี้ตรวจสอบการแสดงออกของ SRPK1 และผลของการยับยั้ง SRPK1 ต่อความสามารถในการมีชีวิตและการสร้างหลอดเลือดใหม่ของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีโดยใช้สารยับยั้งต่อ SRPK1 คือ SPHINX31 ซึ่งเป็นโมเลกุลที่ยับยั้ง จำเพาะต่อ SRPK1 โดยมุ่งหวังผลต่อการยับยั้งการ splicing ของ angiogenic isoform ของ VEGF

Abstract

The serine/arginine-rich protein kinase-1 (SRPK1) is an enzyme that has an essential role in regulating numerous aspects of mRNA splicing. SRPK1 has been reported to be overexpressed in multiple cancers, suggesting it as a promising therapeutic target in oncology. No previous studies reported the role of SRPK1 in cholangiocarcinoma (CCA) cells. This study aimed to examine the expression of SRPK1 and the effects of SRPK1 inhibition on the viability and angiogenesis activity of CCA cells using a selective SRPK1 inhibitor, SPHINX31. Here, we demonstrate that SPHINX31 (0.3‐10 μM) had no inhibitory effects on CCA cells’ viability and proliferation. However, SPHINX31 decreased the mRNA expression of pro-angiogenic VEGF-A₁₆₅a isoform. In addition, SPHINX31 attenuated SRSF1 phosphorylation and nuclear localization, and increased the ratio of VEGF-A₁₆₅b/total VEGF-A proteins. Moreover, when HUVECs were grown in conditioned medium from SPHINX31-treated CCA cells, migration slowed, and tube formation decreased. The present study demonstrates that targeting SRPK1 in CCA cells effectively attenuates angiogenesis by suppressing pro-angiogenic VEGF-A isoform splicing. These findings suggest a potential therapeutic treatment using SRPK1 inhibitors for the inhibition of angiogenesis in cholangiocarcinoma.

KEYWORDS: Angiogenesis, VEGF-A, SRPK1, SPHINX31, Cholangiocarcinoma, Endothelial cells

Citation: Kittiya Supradit, Boonyakorn Boonsri, Jinchutha Duangdara, Thanvarin Thitiphatphuvanon, Chinnawut Suriyonplengsaeng, Thaned Kangsamaksin, Tavan Janvilisri, Rutaiwan Tohtong, Kiren Yacqub-Usman, Anna M. Grabowska, David O. Bates, Kanokpan Wongprasert, Inhibition of serine/arginine-rich protein kinase-1 (SRPK1) prevents cholangiocarcinoma cells induced angiogenesis, Toxicology in Vitro,Volume 82,2022,105385.
DOI: https://doi.org/10.1016/j.tiv.2022.105385

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ, ผู้ช่วยศาสตราจารย์ นพ.ชินวุฒิ สุริยนเปล่งแสง
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย: Kittiya Supradit, Jinchutha Duangdara
แหล่งทุนวิจัย: Thailand research fund, Medical research council UK, Newton fund
ภาพถ่าย: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ

ที่มาและความสำคัญ

ตัวรับ Epidermal growth factor receptor (ErbB) เป็นโปรตีนเป้าหมายที่สำคัญในการวิจัยและพัฒนายาต้านมะเร็ง การวิจัยทางคลินิกระยะที่ 3 ในมะเร็งท่อน้ำดีพบการให้ยาเป้าหมายต่อตัวรับ ErbB Erlotinib ไม่ให้ผลการรักษาที่น่าพอใจ และการให้ยาเคมีบำบัดมาตรฐาน Gemcitabine/Cisplatin ไม่ให้ผลสัมฤทธิ์ในผู้ป่วยเช่นกัน งานวิจัยนี้มุ่งศึกษาผลของยาเป้าหมายต่อตัวรับ ErbB ชนิดต่าง ๆ เมื่อใช้ร่วมกับยาเคมีบำบัดในการยับยั้งเซลล์มะเร็งท่อน้ำดี การศึกษาในชิ้นเนื้อผู้ป่วยมะเร็งท่อน้ำดีพบการแสดงออกของตัวรับ ErbB ชนิดต่าง ๆในระดับสูง การให้ยาเป้าหมาย Afatinib และยาเคมี Gemcitabine แบบ sequential therapy ให้ประสิทธิภาพการยับยั้งเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีมากกว่าการให้ยาแบบเดี่ยวหรือให้ยาพร้อมกัน การศึกษาวิธี 3-D culture ที่จำลองสภาพแวดล้อมของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีอยู่ร่วมกันกับเซลล์ไฟโบรบลาสที่สัมพันธ์กับมะเร็งใกล้เคียงกับเนื้อเยื่อมะเร็งผู้ป่วย พบมีการตอบสนองต่อยาเคมีลดลงแต่ตอบสนองต่อยา afatinib ได้ดี งานวิจัยนี้แสดงให้เห็นว่ายาเป้าหมายตัวรับ Afatinib มีศักยภาพในต่อยอดศึกษาวิจัยทางคลินิกโดยเฉพาะอย่างยิ่งรักษาร่วมกับยาเคมี Gemcitabine แบบ sequential therapy

Abstract

Purpose
The potential of members of the epidermal growth factor receptor (ErbB) family as drug targets in cholangiocarcinoma (CCA) has not been extensively addressed. Although phase III clinical trials showed no survival benefits of erlotinib in patients with advanced CCA, the outcome of the standard-of-care chemotherapy treatment for CCA, gemcitabine/cisplatin, is discouraging so we determined the effect of other ErbB receptor inhibitors alone or in conjunction with chemotherapy in CCA cells.

Materials and Methods
ErbB receptor expression was determined in CCA patient tissues by immunohistochemistry and digital-droplet polymerase chain reaction, and in primary cells and cell lines by immunoblot. Effects on cell viability and cell cycle distribution of combination therapy using ErbB inhibitors with chemotherapeutic drugs was carried out in CCA cell lines. 3D culture of primary CCA cells was then adopted to evaluate the drug effect in a setting that more closely resembles in vivo cell environments.

Results
CCA tumors showed higher expression of all ErbB receptors compared with resection margins. Primary and CCA cell lines had variable expression of erbB receptors. CCA cell lines showed decreased cell viability when treated with chemotherapeutic drugs (gemcitabine and 5-fluorouracil) but also with ErbB inhibitors, particularly afatinib, and with a combination. Sequential treatment of gemcitabine with afatinib was particularly effective. Co-culture of CCA primary cells with cancer-associated fibroblasts decreased sensitivity to chemotherapies, but sensitized to afatinib.

Conclusion
Afatinib is a potential epidermal growth factor receptor targeted drug for CCA treatment and sequential treatment schedule of gemcitabine and afatinib could be explored in CCA patients.

KEYWORDS: Cholangiocarcinoma, ErbB receptors, ErbB targeted drugs, Antineoplastic agents, Gemcitabine, Afatinib

Citation: Boonsri B, Yacqub-Usman K, Thintharua P, Myint KZ, Sae-Lao T, Collier P, Suriyonplengsaeng C, Larbcharoensub N, Balasubramanian B, Venkatraman S, Egbuniwe IU. Effect of Combining EGFR Tyrosine Kinase Inhibitors and Cytotoxic Agents on Cholangiocarcinoma Cells. Cancer Research and Treatment. 2020 Oct 7.
https://doi.org/10.4143/crt.2020.585

RELATED SDGs:

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย:นางสาวบุญญกร บุญศรี
แหล่งทุนวิจัย: Thailand Research Fund and the Medical Research Council (UK), Newton Fund; Rajavithi Hospital Research Fund; Young Researcher Development Program 2018, National Research Council of Thailand; and Research Assistantship, Faculty of Graduate Studies, Mahidol University.