ชื่องานวิจัย ภาษาไทย

การเลือกใช้ประโยชน์โดยจุลินทรีย์และฤทธิ์ทางชีวภาพในการปรับสมดุลลำไส้ของซัลเฟตกาแลคแตนจากสาหร่ายผมนาง (Gracilaria fisheri)

Highlight

งานวิจัยศึกษาศักยภาพสารซัลแฟตกาแลคแตน จากสาหร่ายผมนาง Gracilaria fisheri เป็น biopolymer เพื่อสุขภาพลำไส้ พบว่าซัลแฟตกาแลคแตนทนต่อการย่อยจำลองในช่องปาก กระเพาะ ลำไส้ และไม่ผ่านเซลล์เยื่อบุลำไส้ (Caco-2 monolayer) จึงผ่านไปถึงลำไส้ใหญ่และช่วยกระตุ้นจุลินทรีย์โพรไบโอติกประเภท Lactobacillus casei และ Lactobacillus plantarum เพิ่มการทำงานของเอนไซม์ β-galactosidase และเสริมโครงสร้างเยื่อบุลำไส้ในหนู

ที่มาและความสำคัญ

พอลิแซ็กคาไรด์ซัลเฟตจากสาหร่ายทะเลเป็นสารชีวภาพมูลค่าสูงที่ได้รับความสนใจมากขึ้นเนื่องจากมีคุณสมบัติทางชีวภาพหลากหลายและอาจพัฒนาเป็นผลิตภัณฑ์เพื่อสุขภาพได้ โดยเฉพาะสารในกลุ่มซัลแฟตกาแลคแตน (sulfated galactan) จากสาหร่ายผมนาง Gracilaria fisheri ซึ่งมีโครงสร้างคล้ายใยอาหารหรือพรีไบโอติก อาจมีบทบาทต่อการปรับสมดุลจุลินทรีย์ในลำไส้ อย่างไรก็ตามยังจำเป็นต้องมีข้อมูลสนับสนุนว่าสารซัลแฟตกาแลคแตน สามารถทนต่อการย่อยในระบบทางเดินอาหารและสามารถส่งเสริมการเจริญของโพรไบโอติกหรือเสริมความแข็งแรงของเยื่อบุลำไส้ได้จริง งานวิจัยนี้จึงมุ่งประเมินความคงตัวของโครงสร้าง ความจำเพาะต่อจุลินทรีย์ และผลของซัลแฟตกาแลคแตนต่อสุขภาพลำไส้ เพื่อสนับสนุนการพัฒนา ซัลแฟตกาแลคแตนจากสาหร่ายผมนาง เป็นผลิตภัณฑ์ชีวภาพจากสาหร่ายที่มีศักยภาพในการปรับสุขภาพลำไส้

Abstract

Sulfated polysaccharides from marine macroalgae are increasingly recognized as high-value bioproducts with diverse biofunctional properties. This study investigated sulfated galactan (SG) extracted from the red alga Gracilaria fisheri (G. fisheri) as a gut-modulating algal biopolymer and evaluated its structural stability, microbial selectivity, and effects on intestinal health. SG exhibited a high molecular weight (259 kDa) that remained largely unchanged during simulated oral, gastric, and intestinal digestion, indicating strong resistance to enzymatic and acidic degradation. In vitro fermentation showed that SG selectively stimulated the growth of the probiotics Lactobacillus casei and Lactobacillus plantarum and enhanced β-galactosidase activity. Molecular docking further demonstrated promising interactions between SG subunits and β-galactosidase catalytic residues. An intestinal permeability assay confirmed that SG did not traverse the Caco-2 monolayer, suggesting that it remains unabsorbed and available for probiotic fermentation upon reaching the colon. Consistent with these in vitro results, SG supplementation in mice revealed improved colonic epithelial proliferation and enhanced mucosal architecture, supporting its benefits to gut barrier integrity. Taken together, these findings identify SG as a promising high-value algal bioproduct derived from G. fisheri with potential applications in gut health.

KEYWORDS: Sulfated galactan, Gracilaria fisheri, Prebiotic, Lactic acid bacteria, Gut health

Citation: Promthale P, Khongrin K, Tabtimmai L, Gangnonngiw W, Kiatmetha P, Boonyong C, et al. Sulfated galactan from Gracilaria fisheri exhibits selective microbial utilization and gut-modulating bioactivity. Algal Research. 2026; 97:104769. DOI: 10.1016/j.algal.2026.104769

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
แหล่งทุนวิจัย: สำนักงานปลัดกระทรวงการอุดมศึกษา วิทยาศาสตร์ วิจัยและนวัตกรรม (สป.อว.) และสำนักงานคณะกรรมการส่งเสริมวิทยาศาสตร์ วิจัยและนวัตกรรม (สกสว.)
Credit ภาพ: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
Webmaster: ว่าที่ ร.อ. นเรศ จันทรังสิกุล

Highlight

งานวิจัยได้พัฒนาแอนติบอดีชนิด scFv ใหม่เพื่อมุ่งเป้า EGFR ในมะเร็งท่อน้ำดี (CCA) โดยคัดเลือกจากคลัง phage display ได้ 3 ตัว (E1, G8, H2) ที่จับ CCA จำเพาะและเข้าสู่เซลล์ได้ดี โดย G8/H2 จับโดเมน EGFR-TK ระดับนาโนโมลาร์ ยับยั้งไคเนส ลด EGFR phosphorylation ลดความมีชีวิตและกระตุ้น apoptosis ขณะที่ E1 ยับยั้งการเพิ่มจำนวนผ่าน G1 arrest

ที่มาและความสำคัญ

มะเร็งท่อน้ำดี (cholangiocarcinoma; CCA) เป็นมะเร็งที่มีความรุนแรงสูง ตรวจพบมักอยู่ในระยะลุกลาม และมีทางเลือกการรักษาจำกัด ทำให้ผลการรักษาและอัตราการรอดชีวิตยังไม่ดี แม้จะมีการพัฒนายามุ่งเป้า แต่ผู้ป่วยจำนวนมากยังดื้อยาและเกิดการกลับเป็นซ้ำได้บ่อย ผู้ป่วย CCA แสดงออก epidermal growth factor receptor (EGFR) มากเกินสัมพันธ์กับการกลับเป็นซ้ำและพยากรณ์โรคที่แย่ อย่างไรก็ตามการรักษาที่มุ่งเป้า EGFR ที่ใช้ในปัจจุบันให้ประสิทธิผลจำกัดใน CCA อาจเนื่องมาจากความหลากหลายของก้อนมะเร็ง การส่งสัญญาณชดเชยของเส้นทางอื่น และความสามารถของเซลล์มะเร็งในการหลบเลี่ยงการยับยั้ง ดังนั้นงานวิจัยนี้จึงมีเป้าหมายเพื่อค้นหา “ตัวเลือกใหม่” ในการยับยั้ง EGFR ที่อาจมีศักยภาพมากกว่าเดิม โดยใช้เทคโนโลยี phage display คัดเลือกแอนติบอดีจากคลัง naïve single-chain variable fragment (scFv) มนุษย์ผ่านกระบวนการ subtractive bio-panning เพื่อให้ได้ scFv ที่จับกับเซลล์ CCA อย่างจำเพาะและลดการจับข้ามกับเซลล์ปกติ/มะเร็งชนิดอื่น แนวทางนี้คาดว่าจะได้แอนติบอดีที่สามารถเข้าสู่เซลล์และยับยั้งโดเมนไทโรซีนไคเนสของ EGFR (EGFR-TK) ได้โดยตรง ซึ่งอาจนำไปสู่การพัฒนาเครื่องมือรักษาแบบแอนติบอดีสำหรับ CCA ที่เป้าหมายคือ EGFR

Abstract

Cholangiocarcinoma (CCA) is an aggressive malignancy with limited treatment options. EGFR overexpression is associated with tumor recurrence and poor prognosis, yet current EGFR-targeted therapies show limited efficacy. To identify alternative therapeutic candidates, we performed subtractive bio-panning of a naïve human single-chain variable fragment (scFv) phage display library against CCA cell lysates. Three novel scFv antibodies-E1, G8, and H2-were selected based on preferential binding to CCA cells with minimal cross-reactivity to unrelated cancers and normal fibroblasts. Surface plasmon resonance and kinase inhibition assays demonstrated that G8 and H2 bound the EGFR tyrosine kinase (EGFR-TK) domain with nanomolar affinities and suppressed kinase activity, whereas E1 showed weak binding and no kinase inhibition. All three scFvs exhibited efficient internalization into EGFR-overexpressing HuCCA-1 cells. Functional analyses revealed distinct effects on cell growth: G8 and H2 reduced EGFR phosphorylation, decreased cell viability, and induced apoptosis accompanied by S/G₂-M phase accumulation, whereas E1 primarily inhibited proliferation through G₁-phase arrest without significantly affecting EGFR phosphorylation. Molecular docking predicted that G8 interacts near the ATP-binding pocket and H2 at the dimerization interface of EGFR-TK. These interactions may contribute to EGFR inhibition in HuCCA-1 cells. These findings suggest that G8 and H2 function as intracellular inhibitors of EGFR-TK activity and are promising candidates for antibody-based therapy in EGFR-driven CCA.

KEYWORDS: Antibodies internalization, Apoptosis, Cholangiocarcinoma, EGFR tyrosine kinase, Single-chain variable fragment (scFv)

Citation: Sayinta, A., Duangdara, J., Sumphanapai, T., Rangnoi, K., Boonsri, B., Supradit, K., Jongkamonwiwat, N., Choowongkomon, K., Thitapakorn, V., Yamabhai, M., & Wongprasert, K. (2025). Identification of internalizing ScFvs for EGFR inhibition and apoptosis induction in cholangiocarcinoma cells. Scientific Reports, 15(1), 40648.
DOI: 10.1038/s41598-025-24324-w

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ รองศาสตราจารย์ ดร.นพพร จงกมลวิวัฒน์ อาจารย์ ดร.จินต์จุฑา ดวงดารา
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย: น.ส.อภิญญา สายอินต๊ะ
แหล่งทุนวิจัย: Mahidol University (Research Grant No. NDFR26/2564) and the National Research Council of Thailand (NRCT)
Credit ภาพ: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
Webmaster: ว่าที่ ร.อ. นเรศ จันทรังสิกุล

Highlight

มะเร็งท่อน้ำดี (CCA) รักษายากเพราะมีสภาพแวดล้อมของก้อนมะเร็งซับซ้อนและยังขาดเป้าหมายการรักษาที่ได้ผล งานวิจัยนี้ทดสอบแนวคิด CAR T cell ที่มุ่งเป้าไปที่ mesothelin (MSLN) ซึ่งพบแสดงออกสูงใน CCA โดยพัฒนา CAR T จากแอนติบอดี “กระต่ายแบบ humanized” ที่จับ MSLN ต่างตำแหน่งกัน ผลพบว่า CAR T ที่สร้างจากแอนติบอดี hYP218 (ออกแบบโครงสร้าง/การจัดวางเฉพาะ) สามารถกำจัดก้อนมะเร็งในหนูได้ดี มีความคงอยู่ของเซลล์สูง และมีผลข้างเคียงน้อย ชี้ว่า CAR T targeting MSLN อาจเป็นทางเลือกการรักษาใหม่ที่มีศักยภาพสำหรับ CCA

ที่มาและความสำคัญ

มะเร็งท่อน้ำดี (CCA) เป็นมะเร็งที่รักษายาก เพราะสภาพแวดล้อมของก้อนมะเร็งซับซ้อน มีพังผืดมากทำให้ T cell เข้าไปในก้อนได้ยาก และยังขาด “เป้าหมาย” ที่ยืนยันใช้รักษาได้จริงในคลินิก แม้ CAR T cell จะได้ผลดีในมะเร็งเม็ดเลือด แต่ยังมีข้อจำกัดใน CCA งานวิจัยนี้เลือก Mesothelin (MSLN) เป็นเป้าหมายของการพัฒนา CAR T cell เนื่องจากมีคุณสมบัติสอดคล้องกับหลักเกณฑ์ของ antigen สำหรับการรักษาแบบจำเพาะในมะเร็งท่อน้ำดี (CCA) โดยเฉพาะอย่างยิ่ง MSLN เป็นโปรตีนบนผิวเซลล์ซึ่งเอื้อต่อการจดจำและการทำงานของ CAR T cell และพบการแสดงออกสูงในเนื้อเยื่อ CCA ของผู้ป่วยไทยในสัดส่วนมาก (79%) สะท้อนความเป็นเป้าหมายที่ครอบคลุมผู้ป่วยจำนวนมาก นอกจากนี้ MSLN ถูกจัดอยู่ในกลุ่ม tumor-associated antigen ที่เกี่ยวข้องกับชีววิทยาการดำรงอยู่และความก้าวร้าวของก้อนมะเร็ง จึงมีศักยภาพในการให้ผลเชิงการรักษามากกว่าเป็นเพียงตัวบ่งชี้การเกิดโรค อีกทั้ง CCA ยังขาดเป้าหมายที่ผ่านการยืนยันทางคลินิกอย่างชัดเจน ทำให้การมุ่งพัฒนา CAR T ที่จำเพาะต่อ MSLN เป็นแนวทางเชิงกลยุทธ์เป้าหมายสำหรับ CAR T cell therapy ใน CCA.

Abstract

Background: Chimeric antigen receptor (CAR) T cell therapy has shown promise in treating hematological malignancies. However, the complex tumor microenvironment of cholangiocarcinoma (CCA) poses significant challenges, particularly due to the lack of clinically validated targets and the presence of fibrosis, which hinders T cell infiltration into tumor sites. Mesothelin (MSLN) is highly expressed in CCA. In this study, we aimed to develop CAR T therapy based on a panel of humanized rabbit monoclonal antibodies targeting various epitopes of MSLN, ranging from the N- to the C-terminus, for CCA.

Methods: MSLN expression was assessed in CCA tissue samples obtained from Thai patients. CAR T cells were generated using various single-chain variable fragment (scFv) constructs, engineered in either VH-linker-VL or VL-linker-VH orientation, targeting non-overlapping epitopes of membrane-bound MSLN: hYP218 (proximal region), hYP223 and hYP3 (middle region), and hYP158 (distal region). The cytotoxicity of MSLN-specific CAR T cells was evaluated in 3 preclinical CCA mouse models: Mz-ChA-1, KMCH, and KMBC.

Results: MSLN was strongly expressed in 79% of the CCA specimens. Among the CAR constructs, hYP218-based CAR T cells-with the VL-linker-VH orientation and CD28-derived hinge and transmembrane domains (CD28HTM)-completely eradicated CCA tumors in all 3 CCA xenograft mouse models (Mz-ChA-1, KMCH, and KMBC). Furthermore, hYP218 VLVH CD28HTM CAR T cells showed strong persistence in mice, with low PD-1 expression (a marker of T cell exhaustion) and minimal adverse effects.

Conclusions: Our findings suggest that MSLN is a promising target for CAR T cell therapy in CCA. CAR T cells engineered with hYP218 VLVH CD28HTM, which targets the membrane-proximal epitope of MSLN, may represent a novel therapeutic strategy for the clinical treatment of CCA.

KEYWORDS: Cholangiocarcinoma (CCA), CAR T cell therapy, Mesothelin (MSLN), Xenograft mouse models

Citation: Duangdara, J., Lin, S., Hong, J., Li, D., Suriyonplengsaeng, C., Larbcharoensub, N., Wongprasert, K., & Ho, M. (2026). Preclinical development of mesothelin-targeting CAR T cells for the treatment of cholangiocarcinoma. Hepatology Communications, 10(2), e0888.
DOI: 10.1097/HC9.0000000000000888

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ ผู้ช่วยศาสตราจารย์ นพ.ชินวุฒิ สุริยนเปล่งแสง อาจารย์ ดร.จินต์จุฑา ดวงดารา
แหล่งทุนวิจัย: โครงการปริญญาเอกกาญจนาภิเษก (คปก.)
Credit ภาพ: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ อาจารย์ ดร.จินต์จุฑา ดวงดารา
Webmaster: ว่าที่ ร.อ. นเรศ จันทรังสิกุล

อนุภาคคล้ายไวรัสที่ดัดแปลงให้มี CLEC17A สามารถลดการติดเชื้อของ Macrobrachium rosenbergii nodavirus ในเซลล์ Sf9 ได้อย่างมีนัยสำคัญ

Highlight

งานวิจัยนี้แสดงให้เห็นว่าอนุภาคโนด้าไวรัสที่ดัดแปลงส่วนยื่นให้มีความจำเพาะกับ CLEC17A ( CLEC17A/CRD-MrNV-VLPs ) มีความสามารถในการจับกับกลุ่มของน้ำตาลฟูโคสได้อย่างมีประสิทธิภาพ และมีศักยภาพสูงในการพัฒนาเป็นอนุภาคโนนาที่ช่วยลดการติดเชื้อของ MrNV ในเซลล์ที่ไวต่อการติดเชื้อได้อย่างมีนัยสำคัญ

ที่มาและความสำคัญ

การสร้างและดัดแปลงอนุภาคโนด้าไวรัส MrNV-VLPs ให้มีความจำเพาะต่อกลุ่มน้ำตาลฟูโคสบนเปลือกหุ้ม คาดว่าจะสามารถยับยั้งการติดเชื้อไวรัสได้อย่างมีประสิทธิภาพ เนื่องโนด้าไวรัส ใช้กลุ่มน้ำตาลฟูโคสในการจับและเข้าสู่เซลล์ นอกจากนี้อนุภาคโนด้าไวรัสยังมีคุณสมบัติเด่นด้านความเสถียร และความแรงของการจับ (avidity) ที่สูง นอกจากนี้ยังสามารถนำมาใช้ประโยชน์ได้ง่าย เนื่องจากสามารถผลิต ปริมาณมาก เก็บรักษา และใช้งานได้ง่ายกว่าเลคทินหรือไกลแคนแบบดั้งเดิม

Abstract

Our previous studies demonstrated that Macrobrachium rosenbergii nodavirus (MrNV) infects and replicates in Sf9 insect cells, where fucosylated N- and O-glycans (HexNAc (Fuc)HexNAc-R or Fuc-LacdiNAc) serve as essential binding molecules for viral attachment. Additionally, we showed that the virus-like particles of the virus itself (MrNV-VLPs) were able to bind to the white-tail disease (WTD)-associated tissues and infect Sf9 cells; and these processes were significantly reduced by removing 27 amino acids from the C-terminus of the protruding (P) domain. In this study, we demonstrated that icosahedral particles could still form following the truncation of the P-domain at sites adjacent to known calcium-binding domains (CBDs) present in the S-shell domain in the MrNV capsid protein. We further showed that icosahedral particles could still form after truncation of the P-domain near calcium-binding sites in the S-domain. This generated smaller but intact particles lacking protrusions, designated V250-MrNV-VLPs. The particles with their intact S-shells enabled our complete replacement of the original MrNV capsid protein P-domains with the fucose-binding carbohydrate-recognition domain (CRD) of CLEC17A lectin (Prolectin), successfully creating CLEC17A/CRD-MrNV-VLPs. The chimeric CLEC17A/CRD-MrNV-VLPs were stable icosahedral particles with P-domains structurally distinct from both the smooth V250-MrNV-VLPs and the blade-like domains of wild-type MrNV-VLPs. Furthermore, the chimeric VLPs presented specific binding activities towards immobilized fucosylated glycoconjugates and Sf9 cell protein lysates. Notably, CLEC17A/CRD-MrNV-VLPs were able to reduce MrNV binding and infection in Sf9 cells. Therefore, this study demonstrated the potential for CLEC17A/CRD-MrNV-VLPs as particles that can effectively bind to fucosylated glycans, and their potential development as nanoparticles that can significantly reduce the level of infection by MrNV in susceptible cells.

KEYWORDS: Nodavirus, Virus-like particles, Glycans, Fucosylated lacdinacs, Carbohydrate-recognition domains, Prolectin

Citation: Chantunmapitak, R., Boonkua, S., Thongsum, O. et al. Chimeric virus-like particles carrying the CLEC17A carbohydrate-recognition domain significantly reduce Macrobrachium rosenbergii nodavirus infection in Sf9 cells. Sci Rep 15, 43311 (2025). https://doi.org/10.1038/s41598-025-27357-3

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

2. ZERO HUNGER

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ผู้ช่วยศาสตราจารย์ ดร.มนสิชา สมฤทธิ์
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: รองศาสตราจารย์ ดร.วัฒนา วีรชาติยานุกูล รองศาสตราจารย์ ดร.สมลักษณ์ อสุวพงษ์พัฒนา ผู้ช่วยศาสตราจารย์ ดร.มนสิชา สมฤทธิ์
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย: น.ส.เรืองทิพย์ จันธรรมาพิทักษ์ น.ส.อรวรรณ ทองสุม นายศุภวิชญ์ บุญเกื้อ
ภาพถ่าย: ผู้ช่วยศาสตราจารย์ ดร.มนสิชา สมฤทธิ์
แหล่งทุนวิจัย: ทุนอุดหนุนการวิจัยจากสำนักงานปลัดกระทรวงการอุดมศึกษา วิทยาศาสตร์ วิจัยและนวัตกรรม ภายใต้โปรแกรม 1 สร้างระบบผลิตและพัฒนากำลังคนให้มีคุณภาพ แผนงาน ทุนพัฒนาศักยภาพในการทำงานวิจัยของอาจารย์รุ่นใหม่

Highlight

ซัลเฟตกาแลคแตนจากสาหร่ายแดง Gracilaria fisheri กระตุ้นการสร้างเนื้อเยื่อกระดูกอ่อนโดยเพิ่มการแสดงออกของ Aggrecan, COL2A1 และยีน SOX9 ผ่านการกระตุ้นสัญญาณ integrin-β1/FAK/Akt ในเซลล์กระดูกอ่อนมนุษย์ นอกจากนี้ยังส่งเสริมการยึดเกาะและเพิ่มการแบ่งตัวของเซลล์ ชี้ให้เห็นศักยภาพของซัลเฟตกาแลคแตนในการพัฒนาเป็นสารธรรมชาติสำหรับฟื้นฟูกระดูกอ่อนในโรคข้อเข่าเสื่อม

ที่มาและความสำคัญ

โรคข้อเข่าเสื่อมเป็นภาวะเสื่อมเรื้อรังที่พบมากในผู้สูงอายุ เนื้อเยื่อกระดูกอ่อนในข้อต่อถูกทำลาย ส่งผลต่อการเคลื่อนไหวและคุณภาพชีวิต แนวทางการรักษาในปัจจุบันมุ่งบรรเทาอาการแต่ไม่สามารถฟื้นฟูเนื้อเยื่อที่สูญเสียได้อย่างแท้จริง จึงมีความจำเป็นต้องค้นหาสารชีวภาพที่สามารถกระตุ้นการสร้างกระดูกอ่อน งานวิจัยนี้มุ่งศึกษาซัลเฟตกาแลคแตนจากสาหร่ายแดง Gracilaria fisheri ซึ่งมีโครงสร้างคล้ายไกลโคซามิโนไกลแคนในเนื้อเยื่อกระดูกอ่อนเพื่อประเมินศักยภาพในการส่งเสริมการสร้าง Aggrecan และ COL2A1 ในเซลล์กระดูกอ่อนมนุษย์ นำไปสู่การพัฒนาทางเลือกใหม่ในการฟื้นฟูเนื้อเยื่อกระดูกอ่อนสำหรับการรักษาโรคข้อเสื่อมในอนาคต

Abstract

Osteoarthritis (OA) is characterized by progressive cartilage degradation and limited tissue regeneration, commonly affecting older adults. Current treatment strategies mainly alleviate symptoms without effectively restoring cartilage integrity. Sulfated polysaccharides derived from marine algae have attracted attention for their potential biological effects in promoting cartilage repair. This study examined the chondrogenic activity of sulfated galactans (SG) isolated from the marine red alga Gracilaria fisheri in human C28/I2 chondrocytes, using transforming growth factor-beta 3 (TGF-β3) as a comparative control. SG treatment significantly increased the synthesis of essential cartilage extracellular matrix (ECM) components, such as type II collagen and aggrecan. These effects were mediated through the integrin β1/FAK/Akt signaling pathway, as demonstrated by reduced ECM synthesis following treatment with the Akt inhibitor, MK2206. Additionally, SG improved chondrocyte adhesion and proliferation. These results suggest that sulfated galactans from Gracilaria fisheri may support cartilage ECM synthesis and exhibit potential as biologically active components for osteoarthritis management.

KEYWORDS: Sulfated galactans, Chondrocytes, Type II collagen, ECM, Akt pathway, Integrin β1

Citation: Nambunruang B, Hemstapat R, Supokawej A, Kongchanagul A, Tawonsawatruk T, Wongprasert K. Bioactive sulfated galactans from Gracilaria fisheri promote chondrogenic activity via integrin-β1/FAK/Akt signaling in human chondrocytes. Int J Biol Macromol. 2025 Jun 17;319 (Pt 1):145322. https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2025.145322

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย: นายบุตรโต งามบุญเรือง
แหล่งทุนวิจัย: Fundamental Fund 67
Credit ภาพ: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
Webmaster: ว่าที่ ร.อ. นเรศ จันทรังสิกุล

Highlight

งานวิจัยนี้พัฒนาขี้ผึ้งที่ผสมซัลเฟต กาแลคแทนจากสาหร่ายแดง Gracilaria fisheri โมเลกุลเล็ก (DSG) และอนุพันธ์ DSG ที่เพิ่มหมู่เอสเทอร์ (DSGO) เพื่อประเมินการสมานแผลในหนูทดลอง พบว่าขี้ผึ้งทั้งสองชนิดช่วยเพิ่มอัตราการปิดแผล กระตุ้นการสร้างโครงสร้างนอกเซลล์ การทำงานของไฟโบรบลาสต์ และการสะสมคอลลาเจน ผลวิจัยชี้ให้เห็นว่า DSG และ DSGO มีศักยภาพสูงในผลิตภัณฑ์ซ่อมแซมผิวหนังในอนาคต

ที่มาและความสำคัญ

ซัลเฟตโพลีแซ็กคาไรด์ (Sulfated Polysaccharides, SP) เป็นสารชีวโมเลกุลที่มีคุณสมบัติทางชีวภาพหลากหลาย ซัลเฟต กาแลคแทน (Sulfated Galactan, SG) ที่สกัดจากสาหร่ายแดง Gracilaria fisheri ได้รับการระบุว่ามีศักยภาพในการสมานแผลและประโยชน์ทางการรักษาอื่น ๆ การศึกษาล่าสุดพบว่า ซัลเฟต กาแลคแทนที่ผ่านการย่อยสลาย (Degraded SG, DSG) รวมถึงอนุพันธ์ DSG ที่ปรับปรุงด้วยหมู่เอสเทอร์ (DSGO) มีประสิทธิภาพในการเสริมสร้างการสมานแผลของไฟโบรบลาสต์ อย่างไรก็ตาม ประสิทธิผลของสารธรรมชาติในสภาวะคลินิกมักแตกต่างจากการทดลองในหลอดทดลอง งานวิจัยนี้จึงมุ่งเน้นพัฒนาขี้ผึ้งที่ผสม DSG และ DSGO เพื่อประเมินประสิทธิภาพในการซ่อมแซมผิวหนังในหนูทดลอง

Abstract

Background

The biological activities of sulfated polysaccharides (SP) are well-documented, especially regarding wound healing. Sulfated galactan (SG), a type of SP extracted from the red seaweed Gracilaria fisheri, has been identified as having multiple therapeutic properties related to its wound healing capacity. Recent research indicates that degraded SG (DSG) from G. fisheri, when combined with octanoyl ester (DSGO), can improve wound healing in fibroblasts. However, the effectiveness of natural products in clinical settings often differs from in vitro results. This study aimed to develop and evaluate ointments containing DSG and DSGO for skin repair in an animal model.

Methods

Twenty-four Wistar rats were divided into four groups: (1) normal control, (2) ointment control, (3) DSG ointment, and (4) DSGO ointment. After inducing full-thickness excision wounds, these ointments were applied to the wounds. Wound contraction rate, histopathology, and protein related wound healing expression were then elucidated.

Results

Our findings showed that both DSG and DSGO ointments significantly enhanced wound closure compared to the control groups. Histopathological and biochemical analyses indicated increased extracellular matrix production and fibroblasts, marked by improved fibroblast activity, neovascularization, and collagen deposition. Furthermore, immunohistochemistry and immunoblot analysis revealed that the ointments altered the expression of Ki67, α-smooth muscle actin (α-SMA), E-cadherin, vimentin, collagen, and components of the Smad signaling pathway, all of which are crucial for wound healing. The results also suggested that the DSGO ointment was marginally more effective in promoting wound healing in this model.

Conclusions

These results indicate that ointment supplemented with DSG and DSGO have the potential to enhance skin repair by improving histopathology and altering wound healing-related proteins.

KEYWORDS: developed ointment, excision model, extracellular matrix, sulfated galactan derivative, wound healing

Citation: Jongsomchai, K., Pudgerd, A., Sakaew, W., Wongprasert, K., Kovensky, J., & Rudtanatip, T. (2024). Sulfated Galactan Derivative from Gracilaria fisheri Improves Histopathology and Alters Wound Healing-Related Proteins in the Skin of Excision Rats. Frontiers in bioscience (Landmark edition), 29(11), 388. https://doi.org/10.31083/j.fbl2911388

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
แหล่งทุนวิจัย: Thailand Science Research and Innovation Fund, the National Research Council of Thailand.
Credit ภาพ: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
เว็บมาสเตอร์: ว่าที่ ร.อ. นเรศ จันทรังสิกุล

ชื่องานวิจัยภาษาไทย

CP-673451 ตัวยับยั้งไทโรซีนไคเนสของตัวรับเพลทเลทดีไลฟ์ โกรทแฟคเตอร์ ชักนำให้เกิดการตายของเซลล์แบบอะพอพโทซิสในเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีที่สัมพันธ์กับพยาธิใบไม้ตับโดยยับยั้ง Nrf2 และเพิ่ม ROS

Highlight

ยีน PDGF และ PDGFR มีการแสดงออกในเนื้อเยื่อ CCA มากกว่าเนื้อเยื่อปกติโดยรอบ PDGFR-α มีการแสดงออกในระดับสูงในเซลล์มะเร็งท่อน้ำดี (CCA) ในขณะที่ PDGFR-β ส่วนใหญ่พบใน CAF สารยับยั้งที่จำเพาะต่อ PDGFR คือ CP-673451 ยับยั้งเส้นทาง PI3K/Akt/Nrf2 ในเซลล์ CCA ที่เกี่ยวข้องกับพยาธิใบไม้ตับ ส่งผลให้การแสดงออกของยีนต้านอนุมูลอิสระลดลง จากการควบคุมโดย Nrf2 ที่ลดลง นำไปสู่การเพิ่มขึ้นของระดับอนุมูลอิสะในเซลล์ (ROS) ทำให้เซลล์ CCA ตายแบบอะพอพโทซิส งานวิจัยนี้บ่งชี้ว่า CP-673451 มีแนวโน้มเป็นยามุ่งเป้าสำหรับการรักษา CCA

ที่มาและความสำคัญ

งานวิจัยนี้มุ่งเน้นศึกษาบทบาทของ platelet-derived growth factors (PDGFs (PDGFs) และตัวรับ (PDGFRs) ในมะเร็งท่อน้ำดี (CCA) ซึ่งมีบทบาทสำคัญในการอยู่รอดของเซลล์ CCA โดยส่งเสริมการสื่อสารระหว่างเซลล์มะเร็งและไฟโบรบลาสต์ที่เกี่ยวข้องกับมะเร็ง (CAF) ดังนั้น PDGFR จึงมีศักยภาพเป็นเป้าหมายในการรักษา CCA การทดลองทางคลินิกก่อนหน้านี้แสดงให้เห็นประสิทธิภาพที่จำกัด ในการใช้สารยับยั้ง PDGFR สำหรับการรักษา CCA การศึกษานี้มีวัตถุประสงค์เพื่อทำความเข้าใจการแสดงออกของ PDGF/PDGFR และกลไกของสารยับยั้ง PDGFR ใน CCA ที่เกี่ยวข้องกับพยาธิใบไม้ตับ เราค้นพบว่ายีน PDGF และ PDGFR มีการแสดงออกในเนื้อเยื่อ CCA มากกว่าเนื้อเยื่อปกติโดยรอบ PDGFR-α มีการแสดงออกอย่างสูงในเซลล์ CCA ในขณะที่ PDGFR-β ส่วนใหญ่พบใน CAF เราทดสอบสารยับยั้งที่จำเพาะต่อ PDGFR คือ CP-673451 กับเซลล์ CCA ที่เกี่ยวข้องกับพยาธิใบไม้ตับ พบว่า CP-673451 ยับยั้งเส้นทาง PI3K/Akt/Nrf2 ส่งผลให้การแสดงออกของยีนต้านอนุมูลอิสระลดลง จากการควบคุมโดย Nrf2 ที่ลดลง นำไปสู่การเพิ่มขึ้นของระดับอนุมูลอิสระในเซลล์ (ROS) ทำให้เซลล์ CCA ตายแบบอะพอพโทซิส งานวิจัยนี้บ่งชี้ว่า CP-673451 มีแนวโน้มเป็นยามุ่งเป้าสำหรับการรักษา CCA การค้นพบนี้สนับสนุนการตรวจสอบทางคลินิกของ CP-673451 โดยเฉพาะอย่างยิ่งในผู้ป่วย CCA ที่เกี่ยวข้องกับพยาธิใบไม้ตับ

Abstract

Platelet-derived growth factors (PDGFs) and PDGF receptors (PDGFRs) play essential roles in promoting cholangiocarcinoma (CCA) cell survival by mediating paracrine crosstalk between tumor and cancer-associated fibroblasts (CAFs), indicating the potential of PDGFR as a target for CCA treatment. Clinical trials evaluating PDGFR inhibitors for CCA treatment have shown limited efficacy. Furthermore, little is known about the role of PDGF/PDGFR expression and the mechanism underlying PDGFR inhibitors in CCA related to Opisthorchis viverrini (OV). Therefore, we examined the effect of PDGFR inhibitors in OV-related CCA cells and investigated the molecular mechanism involved. We found that the PDGF and PDGFR mRNAs were overexpressed in CCA tissues compared to resection margins. Notably, PDGFR-α showed high expression in CCA cells, while PDGFR-β was predominantly expressed in CAFs. The selective inhibitor CP-673451 induced CCA cell death by suppressing the PI3K/Akt/Nrf2 pathway, leading to a decreased expression of Nrf2-targeted antioxidant genes. Consequently, this led to an increase in ROS levels and the promotion of CCA apoptosis. CP-673451 is a promising PDGFR-targeted drug for CCA and supports the further clinical investigation of CP-673451 for CCA treatment, particularly in the context of OV-related cases.

KEYWORDS: cholangiocarcinoma, Opisthorchis viverrini, CP-673451, PDGFR inhibitor, Nrf2

Citation: Duangdara J, Boonsri B, Sayinta A, Supradit K, Thintharua P, Kumkate S, Suriyonplengsaeng C, Larbcharoensub N, Mingphruedhi S, Rungsakulkij N, et al. CP-673451, a Selective Platelet-Derived Growth Factor Receptor Tyrosine Kinase Inhibitor, Induces Apoptosis in Opisthorchis viverrini-Associated Cholangiocarcinoma via Nrf2 Suppression and Enhanced ROS. Pharmaceuticals. 2024; 17(1):9. https://doi.org/10.3390/ph17010009

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย: Jinchutha Duangdara
แหล่งทุนวิจัย: สำนักงานคณะกรรมการส่งเสริมวิทยาศาสตร์ วิจัยและนวัตกรรม (สกสว.)
ภาพถ่าย: ศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ

Highlight:

สารยับยั้ง SRPK1 ลดกระบวนการฟอสโฟรีเลชั่นของ SRSF1 ในเซลล์มะเร็งท่อน้ำดี ลดการเคลื่อนย้าย SRSF1 ไปยังนิวเคลียส เซลล์ที่ได้รับสารยับยั้ง SRPK1 มีระดับโปรตีน VEGFA-165b เพิ่มขึ้น เซลล์เยื่อบุผนังหลอดเลือด (HUVEC) ที่เพาะเลี้ยงด้วยอาหารเลี้ยงเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีที่ได้รับสารยับยั้ง SRPK1 ที่มีปริมาณ VEGF-A165b สูง เกิดการสร้างหลอดเลือดใหม่น้อยลง

ที่มาและความสำคัญ

มะเร็งหลายชนิดมีการแสดงออกของโปรตีน SRPK1 ซึ่งเป็นโปรตีนควบคุมการ splicing ของ mRNA มากผิดปกติ บ่งชี้ว่ามีศักยภาพเป็นเป้าหมายการรักษามะเร็ง และมะเร็งระยะแพร่กระจายมีการแสดงออกของ angiogenic isoform ของ vascular endothelial growth factor (VEGF) มาก การศึกษานี้ตรวจสอบการแสดงออกของ SRPK1 และผลของการยับยั้ง SRPK1 ต่อความสามารถในการมีชีวิตและการสร้างหลอดเลือดใหม่ของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีโดยใช้สารยับยั้งต่อ SRPK1 คือ SPHINX31 ซึ่งเป็นโมเลกุลที่ยับยั้ง จำเพาะต่อ SRPK1 โดยมุ่งหวังผลต่อการยับยั้งการ splicing ของ angiogenic isoform ของ VEGF

Abstract

The serine/arginine-rich protein kinase-1 (SRPK1) is an enzyme that has an essential role in regulating numerous aspects of mRNA splicing. SRPK1 has been reported to be overexpressed in multiple cancers, suggesting it as a promising therapeutic target in oncology. No previous studies reported the role of SRPK1 in cholangiocarcinoma (CCA) cells. This study aimed to examine the expression of SRPK1 and the effects of SRPK1 inhibition on the viability and angiogenesis activity of CCA cells using a selective SRPK1 inhibitor, SPHINX31. Here, we demonstrate that SPHINX31 (0.3‐10 μM) had no inhibitory effects on CCA cells’ viability and proliferation. However, SPHINX31 decreased the mRNA expression of pro-angiogenic VEGF-A₁₆₅a isoform. In addition, SPHINX31 attenuated SRSF1 phosphorylation and nuclear localization, and increased the ratio of VEGF-A₁₆₅b/total VEGF-A proteins. Moreover, when HUVECs were grown in conditioned medium from SPHINX31-treated CCA cells, migration slowed, and tube formation decreased. The present study demonstrates that targeting SRPK1 in CCA cells effectively attenuates angiogenesis by suppressing pro-angiogenic VEGF-A isoform splicing. These findings suggest a potential therapeutic treatment using SRPK1 inhibitors for the inhibition of angiogenesis in cholangiocarcinoma.

KEYWORDS: Angiogenesis, VEGF-A, SRPK1, SPHINX31, Cholangiocarcinoma, Endothelial cells

Citation: Kittiya Supradit, Boonyakorn Boonsri, Jinchutha Duangdara, Thanvarin Thitiphatphuvanon, Chinnawut Suriyonplengsaeng, Thaned Kangsamaksin, Tavan Janvilisri, Rutaiwan Tohtong, Kiren Yacqub-Usman, Anna M. Grabowska, David O. Bates, Kanokpan Wongprasert, Inhibition of serine/arginine-rich protein kinase-1 (SRPK1) prevents cholangiocarcinoma cells induced angiogenesis, Toxicology in Vitro,Volume 82,2022,105385.
DOI: https://doi.org/10.1016/j.tiv.2022.105385

RELATED SDGs:

SDG Goal หลัก ที่เกี่ยวข้อง

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

SDG Goal ที่เกี่ยวข้องอื่น ๆ

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ, ผู้ช่วยศาสตราจารย์ นพ.ชินวุฒิ สุริยนเปล่งแสง
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย: Kittiya Supradit, Jinchutha Duangdara
แหล่งทุนวิจัย: Thailand research fund, Medical research council UK, Newton fund
ภาพถ่าย: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ

ที่มาและความสำคัญ

ตัวรับ Epidermal growth factor receptor (ErbB) เป็นโปรตีนเป้าหมายที่สำคัญในการวิจัยและพัฒนายาต้านมะเร็ง การวิจัยทางคลินิกระยะที่ 3 ในมะเร็งท่อน้ำดีพบการให้ยาเป้าหมายต่อตัวรับ ErbB Erlotinib ไม่ให้ผลการรักษาที่น่าพอใจ และการให้ยาเคมีบำบัดมาตรฐาน Gemcitabine/Cisplatin ไม่ให้ผลสัมฤทธิ์ในผู้ป่วยเช่นกัน งานวิจัยนี้มุ่งศึกษาผลของยาเป้าหมายต่อตัวรับ ErbB ชนิดต่าง ๆ เมื่อใช้ร่วมกับยาเคมีบำบัดในการยับยั้งเซลล์มะเร็งท่อน้ำดี การศึกษาในชิ้นเนื้อผู้ป่วยมะเร็งท่อน้ำดีพบการแสดงออกของตัวรับ ErbB ชนิดต่าง ๆในระดับสูง การให้ยาเป้าหมาย Afatinib และยาเคมี Gemcitabine แบบ sequential therapy ให้ประสิทธิภาพการยับยั้งเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีมากกว่าการให้ยาแบบเดี่ยวหรือให้ยาพร้อมกัน การศึกษาวิธี 3-D culture ที่จำลองสภาพแวดล้อมของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีอยู่ร่วมกันกับเซลล์ไฟโบรบลาสที่สัมพันธ์กับมะเร็งใกล้เคียงกับเนื้อเยื่อมะเร็งผู้ป่วย พบมีการตอบสนองต่อยาเคมีลดลงแต่ตอบสนองต่อยา afatinib ได้ดี งานวิจัยนี้แสดงให้เห็นว่ายาเป้าหมายตัวรับ Afatinib มีศักยภาพในต่อยอดศึกษาวิจัยทางคลินิกโดยเฉพาะอย่างยิ่งรักษาร่วมกับยาเคมี Gemcitabine แบบ sequential therapy

Abstract

Purpose
The potential of members of the epidermal growth factor receptor (ErbB) family as drug targets in cholangiocarcinoma (CCA) has not been extensively addressed. Although phase III clinical trials showed no survival benefits of erlotinib in patients with advanced CCA, the outcome of the standard-of-care chemotherapy treatment for CCA, gemcitabine/cisplatin, is discouraging so we determined the effect of other ErbB receptor inhibitors alone or in conjunction with chemotherapy in CCA cells.

Materials and Methods
ErbB receptor expression was determined in CCA patient tissues by immunohistochemistry and digital-droplet polymerase chain reaction, and in primary cells and cell lines by immunoblot. Effects on cell viability and cell cycle distribution of combination therapy using ErbB inhibitors with chemotherapeutic drugs was carried out in CCA cell lines. 3D culture of primary CCA cells was then adopted to evaluate the drug effect in a setting that more closely resembles in vivo cell environments.

Results
CCA tumors showed higher expression of all ErbB receptors compared with resection margins. Primary and CCA cell lines had variable expression of erbB receptors. CCA cell lines showed decreased cell viability when treated with chemotherapeutic drugs (gemcitabine and 5-fluorouracil) but also with ErbB inhibitors, particularly afatinib, and with a combination. Sequential treatment of gemcitabine with afatinib was particularly effective. Co-culture of CCA primary cells with cancer-associated fibroblasts decreased sensitivity to chemotherapies, but sensitized to afatinib.

Conclusion
Afatinib is a potential epidermal growth factor receptor targeted drug for CCA treatment and sequential treatment schedule of gemcitabine and afatinib could be explored in CCA patients.

KEYWORDS: Cholangiocarcinoma, ErbB receptors, ErbB targeted drugs, Antineoplastic agents, Gemcitabine, Afatinib

Citation: Boonsri B, Yacqub-Usman K, Thintharua P, Myint KZ, Sae-Lao T, Collier P, Suriyonplengsaeng C, Larbcharoensub N, Balasubramanian B, Venkatraman S, Egbuniwe IU. Effect of Combining EGFR Tyrosine Kinase Inhibitors and Cytotoxic Agents on Cholangiocarcinoma Cells. Cancer Research and Treatment. 2020 Oct 7.
https://doi.org/10.4143/crt.2020.585

RELATED SDGs:

3. GOOD HEALTH AND WELL-BEING

17. Partnerships for the goals

ผู้ให้ข้อมูล: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่ออาจารย์ที่ทำวิจัย: รองศาสตราจารย์ ดร.กนกพรรณ วงศ์ประเสริฐ
ชื่อนักศึกษาที่ทำวิจัย:นางสาวบุญญกร บุญศรี
แหล่งทุนวิจัย: Thailand Research Fund and the Medical Research Council (UK), Newton Fund; Rajavithi Hospital Research Fund; Young Researcher Development Program 2018, National Research Council of Thailand; and Research Assistantship, Faculty of Graduate Studies, Mahidol University.